روش‌های مختلف الایزا را بشناسیم ( قسمت اول )
Immunometric/Sandwich ELISA :
تست های ایمونومتریک، هم‌چنین به عنوان ELISA ساندویچ شناخته می‌شود و از دو نوع آنتی‌بادی اختصاصی برای آنتی‌ژن استفاده می‌کنند تا آنتی‌ژن‌ها را در چاهک شناسایی کنند. آزمایش‌های ایمونومتری نشان دهنده ارتباط مستقیم بین غلظت آنتی‌ژن و پاسخ سوبسترا است. آنتی‌ژن با آنتی‌بادی دوم که برای آنتی‌ژن اختصاصی است، در یک انکوباسیون دوم قرار می‌گیرد. آنتی‌بادی تشخیصی می‌تواند با یک آنتی‌بادی آنزیمی ثانویه کونژوگه شود. هنگامی که از سوبسترای آنتی‌بادی کونژوگه برای تولید رنگ اضافه می‌شود، نمونه‌هایی با غلظت آنتی‌ژن بالا سیگنال بیشتری نسبت به نمونه با غلظت آنتی‌ژن کم، تولید می‌کنند.تولید سیگنال رنگی متناسب با مقدار غلظت ماده در نمونه است که برای تعیین آن می‌توان از نمودار استاندارد استفاده کرد. کیت‌های ایمونولوژیک بسیار خاص هستند زیرا به یک جفت آنتی‌بادی برای جذب و تشخیص نیاز دارند. آن‌ها هم‌چنین در مقایسه با نمونه‌های پیچیده و بدون نیاز به استخراج نمونه قبل از تجزیه و تحلیل، سازگار هستند.
Competitive ELISA :
در روش رقابتی، آنتی‌ژن نمونه برای اتصال به مکان‌های محدود در آنتی‌بادی با آنزیم نشانگر رقابت می‌کند. این مساله باعث ایجاد رابطه معکوس بین غلظت آنتی‌ژن و جریان سوبسترا می‌شود. الایزا رقابتی معمولا از یک آنتی‌بادی واحد به یک آنتی‌ژن با وزن مولکولی کمتری استفاده می‌کنند، عموما کمتر از 10،000 دالتون. هنگامی که سوبسترای کونژوگه به چاهک اضافه می‌شود، نمونه‌هایی با غلظت آنتی‌ژن بالا یک سیگنال کمتری نسبت به آن‌هایی که حاوی غلظت آنتی‌ژن کم هستند تولید می‌کنند و باعث ایجاد ارتباط معکوس بین غلظت آنتی‌ژن در نمونه و رنگ در آزمایش می‌شود. سپس این رابطه می‌تواند برای استخراج غلظت آنتی‌ژن در یک نمونه ناشناخته از یک منحنی استاندارد استفاده شود. این نوع واکنش یکی از معدود روش‌های ممکن برای آنتی‌ژن‌های با وزن مولکولی کم و با تعداد محدودی از اپی‌توپ‌ها استفاده می‌شود.
منابع:
Zhang, Y., Zhang, Y., Hou, T., Li, R., Xue, Q. and Wang, S., 2019. Homing peptide-based ELISA-like method for the selective and sensitive determination of fibrin. Analytical Methods, 11(7), pp.950-954.
Chen, Y., Liang, Y., Lv, R., Xia, N., Xue, T. and Zhao, S., 2019. An immunological determination of somatostatin in pharmaceutical by sandwich ELISA based on IgY and polyclonal antibody. Microchemical Journal, 145, pp.532-538.
